电子显微镜以其卓越的分辨率，为我们揭示了光镜下无法捕捉的生物样品细节。但为了更好地利用这一强大工具，理解不同的生物电镜成像方式及其相应的样品制备流程至关重要。

　　针对不同的样品和不同的成像目标，蔡司扫描电镜生物样品制样方法多种多样，并可能需要根据具体情况对制样方法进行调整。但是制样操作基本步骤的一些基本原则和注意事项是共通的。

　　取材：取材的好坏直接决定了最终成像的结果，一定要打起12分的注意。

　　准 样品尽量新鲜，取材部位准确;取材部位解剖水平的准确定位要求误差应≤1mm

　　快 样品在离体后以最快的速度浸入初固定液

　　小 取材标本粒径必须与固定液的固定能力相适应，一般以1mm3的粒径为宜

　　轻 解剖用具要锋利，动作要轻巧，避免机械牵拉

　　冷 生理温度固定，低温操作, 避免细胞自溶

　　固定：对样品进行充分而合适的固定可以稳定组织细胞中的各种成分，让超微结构在后续的处理步骤中得到更好的保留。

　　通常使用醛类化合物(戊二醛、多聚甲醛)和锇酸对样品进行固定

　　固定剂要足量，使样品充分浸没在固定液中

　　根据样品情况选择合适的缓冲液，并对溶液进行pH值和渗透压的调节

　　漂洗：各步骤之间漂洗要充分，防止化学试剂间发生反应形成沉淀。

　　脱水：通常使用乙醇和丙酮进行逐级脱水，根据样品情况对脱水的梯度和时间进行调整，注意保证样品脱水要彻底。

　　渗透包埋：在脱水剂中逐步提高树脂的浓度，使树脂缓慢浸入样品，最终完全替代脱水剂，在合适的条件下使树脂聚合硬化，可以根据应用需求对树脂配方进行调整以实现不同硬度的包埋效果。

　　染色：为了增加样品成像的衬度，可以在包埋前对样品块进行染色，也可以对超薄切片进行后染色。通常使用的染色试剂包括乙酸双氧铀、柠檬酸铅、天冬氨酸铅等，要注意试剂的配置和过滤以免发生重金属沉淀。

　　*需要对样品进行表面形貌观察时还要注意：

　　清洗：固定前要充分去除样品表面的黏液和污物，暴露样品表面的微细结构。

　　临界点干燥：目前的临界点干燥仪大部分为半自动或全自动仪器，操作时注意严格遵守操作规程。样品干燥后取放要轻柔，防止造成样品破损。

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